Dans ce TP, nous allons identifier et quantifier les sucres contenus dans un jus d’orange. C'est une analyse courante en agroalimentaire.
Préparation de l'échantillon : après avoir été dilué au 1/10 à l'aide d'eau distillée, l'échantillon est centrifugé puis filtré : nous assistons ici à l'opération de filtration. Le résultat s'appelle un filtrat.
Ce filtrat est ensuite injecté dans le chromatographe à l’aide d’une seringue. Cet appareil mélange le filtrat à analyser avec un solvant et fait circuler l’ensemble à très haute pression dans la colonne en acier inoxydable, puis le réfractomètre.
Présentation du mélange étalon : l'appareil est étalonné pour les trois sucres suivants-glucose- fructose-saccharose. Le graphique obtenu est un chromatogramme étalon.
Chromatographie : vous pouvez observer la colonne en acier inoxydable dans laquelle circulent à très haute pression le mélange solvant plus filtrat injecté. Dans cette colonne chaque sucre progresse à sa vitesse est donc arrive dans le détecteur à des instants différents. Ce détecteur est un réfractomètre, soit un appareil qui identifie le sucre correspondant par son indice de réfraction. Le système d'enregistrement relié au réfractomètre permet de tracer les variations de l'indice de réfraction en fonction du temps : c'est le chromatogramme caractéristique du filtrat injecté.
Identification, quantification : par comparaison avec le chromatogramme étalon on identifie les sucres présents dans le jus d'orange. Les surfaces de chaque pic du chromatogramme résultat permettent de quantifier les sucres identifiés.
